間充質干細胞可以從多種組織中分離出來，不同組織來源的間充質干細胞在分離方法上存在一定的差異。以下是對不同組織來源間充質干細胞分離方法差異的詳細介紹：

一、人臍帶間充質干細胞

傳統(tǒng)分離方法與新方法對比：目前利用傳統(tǒng)分離提取細胞的方法所獲取的人臍帶來源的間充質干細胞與臍帶組織中所含人臍帶來源的間充質干細胞的理論值相差甚遠，造成臍帶組織的極大浪費，阻礙了間充質干細胞的規(guī)模化制備培養(yǎng)。因此，需要建立一套高效分離人臍帶間充質干細胞的方法。

膠原酶和胰蛋白酶 - EDTA 消化法：收集的臍帶組織可通過膠原酶 type-I 和胰蛋白酶 - EDTA 消化進行間充質干細胞的分離。將處理后的分離細胞沉淀接種在含有 DMEM Nutrient Mix F12、10% FBS 和 1% 抗生素抗真菌溶液的六孔板中，在 37°C、5% CO?的濕潤培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至 70 - 80% 融合度。然后使用 Neubauer 計數(shù)板在顯微鏡下通過臺盼藍染色進行細胞定量和活力評估。研究發(fā)現(xiàn)，胰蛋白酶消化兩種組織產(chǎn)生的細胞數(shù)量少于膠原酶處理，但胰蛋白酶處理提供的活細胞數(shù)量高于膠原酶處理。因此，胰蛋白酶 - EDTA 可用于分析研究，在這種情況下細胞產(chǎn)量的重要性較低。

二、小鼠臍帶和脂肪來源間充質干細胞

組織采集：對于瑞士白化小鼠，臍帶間充質干細胞從胎兒的臍帶收集，脂肪來源間充質干細胞從小鼠的腹部脂肪組織收集。

分離方法：同樣采用膠原酶 type-I 和胰蛋白酶 - EDTA 消化從收集的組織中分離 AD-MSCs 和 UC-MSCs，分離后的細胞處理和培養(yǎng)方法與人臍帶間充質干細胞類似。

三、奶牛脂肪間充質干細胞

組織采集與消化：采集不同部位奶牛脂肪，選用 0.25％胰蛋白酶消化，并進行貼壁培養(yǎng)，獲取原代奶牛 AD-MSCs。

細胞形態(tài)與生長特征：通過傳代培養(yǎng)進一步純化擴增。顯微鏡觀察細胞形態(tài)及生長特征，兩種不同部位的 AD-MSCs 均呈長梭形、紡錘形或多角形貼壁生長，且兩個部位來源的 AD-MSCs 的生長曲線差異較小。

表面標志物及分化能力：分離培養(yǎng)的 AD-MSCs 的表面標志物 CD44 和 CD73 呈陽性表達，而 CD34 和 CD45 呈陰性表達。在誘導分化培養(yǎng)試驗中呈現(xiàn)出較強的成脂和成骨分化能力。

四、人肺癌組織來源間充質干細胞

分離方法：采用組織塊分離法分離人肺癌組織來源的間充質干細胞。

細胞形態(tài)與生物學特征：所分離的細胞呈成纖維樣形態(tài)，并呈漩渦式生長；其 CD73、CD90、CD105 和 CD166 呈陽性表達，CD14、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR 均呈陰性表達，且具有向成骨細胞、脂肪細胞和成軟骨細胞分化的能力。

五、兔脂肪間充質干細胞

組織采集與消化：體外分離兔腹股溝皮下脂肪組織，采用 0.1％I 型膠原酶消化，用含 10％胎牛血清的高糖培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng)兔 ADSCs。

細胞特性分析：對其細胞形態(tài)、體外增殖能力、多向分化潛能及表面標記進行分析。體外分離培養(yǎng)的兔 ADSCs 具有良好的細胞形態(tài)、較強的增殖能力，體外經(jīng)二向誘導，具有成脂及成骨分化潛能，兔第 2 代 ADSCs 表面標記 CD34、CD105 陽性，Sca-1 高表達，幾乎不表達 CD45 及 SSEA-1。

六、人骨髓來源間充質干細胞

分離方法：密度梯度離心從人骨髓分離單個核細胞，接種培養(yǎng) 3h 后頻繁換液，培養(yǎng)至第 14d 時用 0.25% 胰酶室溫作用 2min 移種后繼續(xù)培養(yǎng)至第 21d。

細胞鑒定：采用流式細胞術檢測收獲細胞的表型分子。收獲細胞在特定條件下誘導培養(yǎng)至第 14d，分別采用茜素紅染色、甲苯胺藍染色和油紅染色進行鑒定。第 21d 時均一的長梭狀成纖維樣細胞鋪滿瓶底，它們高表達 CD105、CD73、CD90 并低表達 CD45、CD34 和 CD14，能夠被誘導分化為骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞。

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